Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。
经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分……
原理听起来颇为复杂,但其实真正要操作的时候,主要的步骤主要是以下几步。
试剂准备,也就是让蛋白质跑的跑道,需要聚丙烯酰胺凝胶电泳来提供。
然后是参赛的运动员,是把肿瘤细胞裂解之后,使得内部的蛋白质充分释放,然后制作了标准曲线。
制作标准曲线之后,就可以让自己处理的细胞产生的‘运动员’开始上赛道了。
医疗系学霸 第68章 巨大收益(求收藏,求追读)(完整版)精彩评论( 則)